对照组、放射治疗组、电化学治疗组及放疗结合电化疗组，种植小鼠骨肉瘤细胞株S180,采用比较肿瘤生长曲线，流式细胞光度术及电泳等方法、进行多方而的分析
结果 与未治疗组相比，3个治疗组中肿瘤生长均得到有效抑制，在治疗后8h,对照组中1.1期细胞只有11.5%、而单旋疗.单电化疗及结合组G1期分别:与70.3%，72.8%.78%。在16h未治疗没育凋亡细胞出现，而3个治疗组中凋亡细胞分别占13.0%、18.8%.31.3%电泳也显示有功导的DNA连续性降解片断。
结论 肿瘤生长曲线表明两种方法的结合，有协同抑制作用。流式细胞光度术义电泳检测结果表明，放疗或电化疗均能引起细胞G1期阻滞.诱导细胞出现凋亡.而两者结合也能华征胞强烈困滞于G1期、并能进一步诱导细胞凋亡。这些结果显示放疗与电化疗间有协同抗癌作用.其诱导细胞引起G1期阻滞及凋亡之间可能有密切的相关性。
【关辑词】放射疗法、电化学。肿瘤
Gi arrest and apoptosis of mouse tumor after rs div nl be rap y and electrochemical therapy XIAO wei gun. XLZXioonua. ZHANG shanuen. Departmtent of Rudiutl rupy、beijing cuncer Hospital, beijing 100036, chnu
【abstract】 ou j ect ive To analyze the cvp erat ive anti-umor effects of radiotherapy(rt) and
electrochemical therapy(ect) in mouse, methods Mive of kunming transplanted S180 as cites carcinoma wereused throughout this study. The ex pen mental rmuce were divided into four groups: A, untreated control, B, RTalone C. ECT albone、and D. RT plus ECI. The met bod s of turn or growth curve. Flow ey tome try andelect rcp h bores is were used for anu a lysis. Results The tumor growth curve showed that the tumor growth wasdelayed m group B. C. D especially in D sing FCM and el ecru ph ores is, the results showed that in 8 h thepercentage of Gl phase in group B. C and D were respectively 70. 3 %, 72. 8 %, 78 %, cm pared to 41. 5% inA, and ip 16 h the percentage of a pop to tic cels in group B, C and D、were 13. 0 %、18. 8 % and 31. 3%.cm pared to 0 % in A. Obvicus DNA ladders were presented in el ecu rcp h ores is in the three treated groups at thisrtime. Conclusion This study suggested that RT and FCTT have the c operative anti-turnor effects. This studyalso revealed there were marked Glt arrest and in o creased a pop toss promoting cell death whwn cmb in ingradiotherapy with electrochemical therapy. Those indicated that the co operative anti-tumor ef fei between RTsnxl ECT is related closely to the in due of GI arrest and a peg pts sis in mice tumor cells.
【key words】 Radiotherapy; Electrochenistry; Neuplasm
电化疗已应用临床多年，有一定疗效，但综台治疗尚不多见。本研究将放疗与电化疗结合应用于难治的肿瘤，显示出有一定的抗癌协同作用，从分子生物学角度来探讨放疗与电化疗结合增效的机制。
1材料与方法
1.1实验动物与肿瘤
昆明种小鼠，雌性，体质量18~22g:将小鼠骨肉瘤细胞株S180腹水稀释液0.2m(含肿瘤细胞1.3×10的六次方)，种植于小鼠后腿外侧皮下、1周左右，肿瘤长至1cm³,随机分为4个组:未治疗对照组、放射治疗组、电化学治疗组及放疗与电化疗结合组。
1.2治疗方法
放射治疗组:0Co治疗机1次照射10Gy,剂量率为60cgy/min.非麻醉下用自制器具固定小鼠腿部的肿瘤进行局部照射。电化疗组:用ZEZ-Ⅱ型电化疗仪进行电化疗，麻醉状态下将阳极针插入小鼠右腿上肿瘤组织的中心，阴极针插在肿瘤内侧边缘，接通电源，治疗电流为5ma,测定电压为6-7V,总电量为15C.持续时间为45min。放疗与电化疗结合组:放射治疗后16h进行电化疗，方法同上。未治疗对照组:不做任何治疗。
1.3流式细胞光度术
取小鼠瘤组织1g左右，用生理盐水洗净，剪碎组织，200目铜网过滤后得到细胞悬液。用预冷PRS洗两次，用体积分数为75%的酒精固定，4℃过夜，上机前用PBS洗两次，用RNA酶(100g/ml)消化，37℃，30min,加入800upi染液(100g/ml), 4℃避光染共色30min,用COULTER, EPICS-PROFILE检测细胞中DNA含量，再用MULTICYCLE软件分析各周期分布及凋亡的诱导。
1.4提取DNA
取新鲜瘤组织剪碎，加人TE缓冲液4004I匀浆，加入20%SDS至终浓度1%，混匀，加入蛋白酶K至终浓度100200ug/ml,混匀后放人60℃水溶30min。再混匀后37℃过夜，用Tris-hci(ph8. 0)平衡酚，酚:氯仿(1:1)及氯仿:异戊醇(24:1)各抽取1次，取上层水相，加入0.2倍体积的醋酸胺NHLAC(PH 2. 3，
4.0)，2.5倍体积的无水乙醇-20℃过夜。5000g离心20min,去上清，用体积分数为75%的酒精洗涤，吹干，溶于含RNA酶20g/ml的T中，-20℃保存。
1.5电泳
取2I样品上样，在含5g/ml溴化乙锭(EB),
性3"）
1.5%琼脂糖凝胶中进行电泳，50V, 30 min。
2结果
2.1治疗后，每天测量肿瘤的大小，计算相对增长率，得到图1曲线。曲线显示照射(10Gy),电化疗(15C)均能有效抑制肿瘤的生长速率，两种方法结合起来有协同抑癌作用。
2.2于治疗后0、8，16h分别取样，进行DNA含量分析，测各周期时相分布，结果见表1。与治疗0时相比8h的放疗组、电化疗组和结合组中均可看到有G1期。未治疗红b业&ktr:山1中地化I址山论并用放疗与电化行组图2
15%琼脂糖凝胶电养结果阻滞现象出现，结合组中GI期最强烈(P<0. 01)。
16h后这3组中还出现了凋亡峰，但在相应的未治疗组中变化却不明显（P>0. 05).
各组治疗后16h的肿瘤组织，提取DNA,电泳结果见图2。从图中可见放疗组、电化疗组及结合组中出现了DNA连续性降解片段，而未治疗组中没有出现，这表明在治疗组中均出现了显著的调亡细胞，但3个治疗组间没有差异.
3讨论
肿瘤治疗中，放射治疗是重要的治疗手段，而电化疗作为一种新的抗癌疗法，也引起了许多专家的兴趣。文献报道电化疗的有效率可达70%以上[13]，但多为单用电化疗，并用其他疗法的尚不多见。近来有实验研究发现电化疗结合放疗有协同抗感作用-1，但其抗癌机制尚需进一步研究。
文献报道在一定剂量的射线、紫外线、化学药物等因素的刺激下，细胞产生DNA损伤，哺乳动物对于DNA损伤能诱发一系列复杂的细胞反应³，其中包括细胞周期调控中引起周期阻断基因的活化，DNA损伤修复因子的活化，引起DNA修复反应，以及细胞凋亡(APOPTOSIS)[6],这是通过一系列的周期调控中控制点(CHECKPOINT)的负反馈途径所调控的7
本研究在不同治疗方法下测量得到的肿指生长曲线表明:照射后8h出现Gl期阻滞，占70.3%，16h后出现凋亡峰，占总体细胞数的13.0%，在电泳结果图2中有明显的DNA连续性降解片段。单用电化疗时，取两电极处细胞分析，8h后也出现了G期阻滞，i72. 8%,并见大量细胞碎片，这是因为在电解作用|两极出现强酸强碱性，细胞溶解破碎。16h后湖亡细胞占18.8%。当两种治疗方法结合时，Gl期阻带增加到78%，凋亡的比例为31.3%，比单治疗组均有所提高(P<0. 05),这个结果与小鼠肿瘤增长曲线一致，这表明结合治疗的协同抗癌作用可能与细胞的调控机制有关:在细胞周期调控中，有一些关键的控制点，外界的各种刺激因子通过一系列的信息传递途径作用于控制点，诱导细胞内一系列反馈调节反应17。放疗或电化疗的主要作用可能在G1期，均引起细胞内DNA损伤，这种损伤能使一些抑癌基因如p53, p21等诱导合成或活化国，使细胞无法激活进人S期所需要的复合物如Cdk4/cyclind或Ckd2/cycline,无法启动GI/S的转换将细胞阻滞在GI期。同时细胞内存在多条依赖于p53的细胞程序化死亡调控途径19。在抑制细胞分裂的因素作用下，启动细胞内凋亡的诱导反应，导致细胞离开分裂周期而进入凋亡，最终导致细胞分裂能力下降，甚至引起肿瘤细胞死亡。
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(收稿日期:1998-10-19》
